口蹄疫免疫抗体监测的方法及意义

一、检测方法

特异性抗体检测在疫病诊断、传染病流行病学调查及评价疫苗免疫效果评价具有重要的参考意义。现阶段，抗体检测的方法较多，除传统的沉淀反应，凝集试验，补体结合试验外，标记免疫测定已成为主要的免疫抗体测定技术(如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等)，而酶联免疫测定是目前应用最为广泛的方法之一。

1、中和抗体

中和抗体是当病原微生物侵入机体时产生的相应的抗体。病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体，中和抗体的作用机制是改变病毒表面构型，阻止病毒吸附于易感细胞，使病毒不能穿入胞内进行增殖；病毒与中和抗体形成的免疫复合物，易被巨噬细胞吞噬清除；有包膜的病毒表面抗原与中和抗体结合后，激活补体，可导致病毒的溶解。

病毒中和试验是世界动物卫生组织推荐的标准方法，抗体与口蹄疫病毒特异性中和作用使病毒失丧失感染力，需要培养病毒敏感细胞；所需的病毒必须为活病毒，具有感染性。

2、结构蛋白抗体

在原则上来说，只要是异己蛋白质进入机体，就会被免疫系统识别，然后产生相应抗体。灭活疫苗的本质是一种抗原，只不过它通过改造已经没有了病毒的毒性。当疫苗注入到机体之后，由于病毒抗原含有多种不同的蛋白，因此机体会产生不同的抗体。然而，并非所有的结构抗体都有抗病毒的作用。

中华人民共和国农业农村部规定的口蹄疫免疫抗体评价的方法分别为液相阻断ELISA抗体检测试验、正向间接血凝试验、VP1结构蛋白抗体检测试验。

2.1 液相阻断ELISA抗体检测试验（国际贸易指定法）

我国目前采取以免疫为主的综合防控措施进行口蹄疫防控，免疫抗体检测是衡量疫苗免疫效果的重要指标。目前,国际粮农组织（FAO）和世界动物卫生组织推荐液相阻断ELISA来对口蹄疫免疫效果进行评价。硏究表明口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测技术具有良好的敏感性、快速诊断性和可重复性,与攻毒保护有很好的相关性,现被广泛应用于口蹄疫免疫抗体水平的监测。此方法专为检测FMD全病毒抗体设计，是针对完整病毒粒子的抗原位点进行抗体定性定量检测,通过对被检血清的倍比稀释,定量测定血清中抗体含量的高低。

此外，液相阻断ELISA 的最大优点是安全性高、适用范围广，摆脱了对细胞培养和实验动物的依赖，使FMD 诊断从专门的生物安全实验室走向普通的应用实验室。液相阻断ELISA 试验原理是抗原抗体在液相中反应，与VNT的试验原理相似，又被称为体外病毒中和试验。液相阻断ELISA 主要用于两方面的目的：①检测FMD非免疫动物特异性抗体，广泛应用于国际贸易和血清流行病学调查；②监测免疫抗体，评价FMD 疫苗免疫效力。

2.2 正向间接血凝试验

口蹄疫病毒抗原包被于醛化绵羊红细胞，简单易行，适合基层单位应用，与中和抗体符合性不高。基本原理是用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验，亦称间接血凝。抗原与其对应的抗体相遇，在一定条件下形成抗原一抗体复合物。但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。将抗原吸附(致敏)在红血球表面，再与抗体结合，红血球便出现凝集现象，不仅肉眼能看见，而且反应的敏感性大大提高。口蹄疫正向间接血凝试验就是将口蹄疫纯化病毒致敏到绵羊红血球表面，制成口蹄疫血凝抗原，用于检测动物血清中的口蹄疫抗体水平。

2.3 VP1结构蛋白抗体检测试验

此方法仅针对口蹄疫合成肽疫苗免疫后抗体的检测，该方法高效、特异、快捷及生物安全性上实现了较完美的结合。但仍与液相阻断ELISA抗体检测结果存在差异。

二、监测的意义

近些年随着国家政策的变化，养殖业规模及方式发生了巨大变化。养殖业已进入快速发展期，其面临着前所未有的挑战和机遇。养殖集约化、规模化程度的加剧使养殖密度快速提升，会给养殖业带来更大的风险。

通过临床是否发病来判定疫苗免疫效果是相对滞后的，也不能达到预判动物抵御病原入侵的能力。而抗体监测，能够正确评价疫苗免疫效果，进而制定科学的免疫程序，同时评判猪场健康状态，预测是否受疾病的威胁，对合理防疫，减少疫病的发生，提高生产效率具有重要的指导意义。